依达拉奉联合异丙酚预处理对乳鼠离体脑皮质细胞缺血/再灌注损伤保护作用的研究

目的观察依达拉奉联合异丙酚预处理对乳鼠离体脑皮质细胞缺血/再灌注（I/R）损伤的保护作用以及脑保护效应的时间窗。方法体外培养出生24 h内SD乳鼠脑皮质细胞7 d,按随机数字表法分为空白对照组、谷氨酸损伤组、药物预处理24 h对照组及药物预处理24、2、0 h组。各药物预处理组分别于谷氨酸损伤（200μmol/L 0.5 h）前24、2、0 h用含100μmol/L依达拉奉和3 mg/L异丙酚的培养基联合预处理原代培养的神经细胞。通过测定神经细胞存活率[四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法]、乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、神经细胞Na+-K+-ATP酶活性观察神经细胞成活和细胞损伤情况;通过测定超氧化物歧化酶（SOD）活性（黄嘌呤氧化酶法）、丙二醛（MDA）含量（硫代巴比妥酸法）观察神经细胞抗氧化和氧化水平;流式细胞仪检测神经细胞凋亡情况。结果与空白对照组比较,谷氨酸损伤组神经细胞存活率[（62.2±23.4）%比（90.5±14.8）%]、SOD活性（U/ml:6.864±2.872比29.569±3.684）、Na+-K+-ATP酶活性(U·mg-1·h-1:0.318±0.146比0.636±0.168)均显著下降,神经细胞凋亡率[（9.4±0.7）%比（6.1±0.2）%]、MDA含量（nmol/ml:0.515±0.101比0.294±0.105）、LDH漏出率[（41.2±1.6）%比（36.8±4.6）%]均显著升高（P<0.05或P<0.01）。与谷氨酸损伤组比较,药物预处理组细胞存活率、SOD活性、Na+-K+-ATP酶活性均显著升高,细胞凋亡率、MDA含量、LDH漏出率均显著下降,并呈时间依赖性,以预处理24 h组作用最为显著[细胞存活率:（89.2±30.3）%比（62.2±23.4）%,SOD活性（U/ml）:17.780±4.514比6.864±2.872,Na+-K+-ATP酶活性(U·mg-1·h-1):0.541±0.052比0.318±0.146,细胞凋亡率:（6.7±0.4）%比（9.4±0.7）%,MDA含量（nmol/ml）:0.319±0.101比0.515±0.101,LDH漏出率:（37.2±1.4）%比（41.2±1.6）%,均P<0.01]。结论依达拉奉联合异丙酚预处理对乳鼠离体脑皮质细胞I/R损伤有明显协同保护作用;且以24 h作为时间窗的脑保护作用最明显。