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重组人组织激肽释放酶基因转染人脐静脉内皮细胞
被引：4
作者：
陈慧
朱鹏立
李体远
余福玲
阮景明
李世峰
吴小盈
杜珙
戴勇
机构：
[1] 福建省立医院省心血管病研究所内科,福建省立医院高干病房,深圳市人民医院中心实验室,福建省立医院省心血管病研究所内科,福建省立医院高干病房,福建省立医院省心血管病研究所内科,福建省立医院省心血管病研究所内科,深圳市人民医院中心实验室,深圳市人民医院中心实验室福建福州,福建福州,广东深圳,福建福州,福建福州,福建福州,福建福州,广东深圳,广东深圳
来源：
关键词：
人组织型激肽释放酶基因;
腺相关病毒载体;
血管内皮细胞;
D O I：
10.16439/j.cnki.1673-7245.2004.05.018
中图分类号：
R346 [];
学科分类号：
1001 ;
摘要：
目的 探讨重组人组织型激肽释放酶 (HK)基因腺相关病毒载体 (rAVV/HK)对体外培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)作用。方法 将HK基因定向克隆入腺相关病毒质粒 pAAV MCS中 ,形成重组腺相关病毒 (rAAV HK)质粒 ,经聚合酶链反应 (PCR)检测和DNA测序后 ,将rAAV HK、pAAV Helper和 pAAV RC 3种质粒通过脂质体共转染 2 93细胞 ,包装成带有HK目的基因的重组rAVV/HK ,采用 β半乳糖苷酶原位染色法测定报告基因rAVV/LacZ在HT10 80中的表达 ,间接计算病毒滴度 ,并观察转染基因在传代细胞中的表达。在相同的条件下体外分别培养HUVECs(对照组 )和rAVV/HK转染的HUVEC(HK转染组 ) 4 8h ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测两组HUVECsHKmRAN的表达 ,并利用硝酸还原酶法和分光光度法分别检测两组HUVECs一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶 (NOS)活性。结果 rAVV/HK病毒滴度为 6 .2× 10 7个 /mL ,LacZ基因能够在第一传代和第六代HT10 80细胞内稳定持续表达。与对照组比 ,HK转染组HUVECsHKmRNA表达增加 (P <0 0 0 1) ;而且HK转染组HUVECs细胞培养液中NO的含量和NOS活性明显增高 ,P值分别 <0 0 1和 <0 0 5。结论 HK基因通过重组腺相关病毒载体可成功转染体外培养的HU VECs ,使其HKmRNA表达增加 ,NOS活性和NO含量升
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