药物诱导细胞凋亡时DNA检测技术的探讨

被引:5
作者
马靖
庞大本
池旭生
彭文烈
徐安龙
机构
[1] 中山大学生命科学学院生化系与新药开发中心!广东广州,中医研究院基础理论研究所!北京,中医研究院基础理论研究所!北京,中山大学生命科学学院生化系与新药开发中心!广东广州,中山大学生命科学学院生化系与新药开发中心!广东广州中国
关键词
细胞凋亡; DNA断裂; 染色质凝聚;
D O I
暂无
中图分类号
Q26 [细胞生物化学];
学科分类号
071009 ; 090102 ;
摘要
比较检测细胞凋亡时DNA变化的三种方法。方法 :联合采用Hoechst33342和PI荧光双染显微镜观察 ,DNA凝胶电泳和流式细胞仪测定三种方法检测甘草提取物诱导MGC 803细胞凋亡时DNA的变化。结果 :低浓度药物作用时 ,荧光显微镜下观察到DNA凝聚和PI排斥 ,但DNA电泳不出现Ladder断裂片段 ,4℃重悬后FCM才能检测到凋亡峰 ;高浓度药物作用时 ,DNA呈Ladder断裂 ,FCM检测到凋亡峰 ,但荧光显微镜下观察到PI着色和DNA凝聚共存。结论 :(1)应慎重使用依据PI着色区分凋亡和坏死细胞的方法;(2)有些情况下 ,凋亡细胞经乙醇固定后DNA断裂片段的逸出是一个缓慢的过程 ,通过4℃重悬可提高流式细胞仪检测凋亡细胞的准确性
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