神经干细胞过表达Hsp75降低Aβ介导的神经毒性

目的:应用腺病毒为载体在体外过表达热休克蛋白75(Hsp75),研究Hsp75蛋白过表达对神经干细胞在Aβ诱导神经毒性中的作用,并初步探讨其作用机制。方法:体外培养小鼠神经干细胞C17.2,实验分为对照组、Aβ处理组、腺病毒阴性感染组和腺病毒Hsp75过表达感染组。使用荧光显微镜观察腺病毒的感染情况并进行细胞免疫鉴定;倒置相差显微镜观察各组神经干细胞的形态;MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测Hsp75和活化型caspase-3蛋白水平。结果:荧光显微镜观察和Western blot检测表明腺病毒成功感染神经干细胞并高效表达Hsp75蛋白。此外,腺病毒感染不会导致细胞形态改变及细胞分化,同时也不会影响细胞活力。与对照组比较,Aβ处理组及腺病毒阴性感染组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率及活化型caspase-3蛋白水平显著增高(P<0.05);然而,Hsp75过表达能显著提高神经干细胞的存活率,减少细胞凋亡和降低活化型caspase-3蛋白水平(P<0.05)。结论:Hsp75过表达对Aβ诱导损伤的C17.2细胞具有明显保护作用,其机制可能是与抑制caspase-3途径依赖的细胞凋亡有关。