银杏内酯B对损伤神经干细胞内HIF-1α及PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨银杏内酯B(GKB)对谷氨酸损伤神经干细胞(NSCs)内的磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)活性的影响,以进一步明确银杏内酯B神经保护作用的分子机制。方法体外培养新生大鼠海马神经干细胞,并建立体外谷氨酸神经干细胞损伤模型。将其分为:(1)对照组;(2)GKB组(终浓度40 mg/L);(3)wortmannin+GKB组;(4)wortmannin组(终浓度10 nmol/L)。Western blot印迹法检测各组NSCs中PI3K、p-Akt、HIF-1α蛋白水平的表达。结果从新生大鼠海马区分离培养出具有自我更新、增殖的神经球,并在细胞球中可以检测到NSCs表面标记物巢蛋白(nestin)及5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)的表达。100～400μmol/L谷氨酸作用NSCs 30 min,培养基中乳酸脱氢酶含量随着谷氨酸浓度的提高而明显增高[分别为(26.94±4.75)U/L,100μmol/L GLU;(38.22±5.86)U/L,200μmol/L GLU;(45.64±5.35)U/L,400μmol/L GLU]。经wortmannin处理后PI3K、p-Akt、HIF-1α蛋白活性较对照组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。wortmannin+GKB组和wortmannin组比较,PI3K、p-Akt、HIF-1α表达明显上调。施加GKB后,PI3K、p-Akt、HIF-1α蛋白表达均较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论银杏内酯B处理诱导损伤神经干细胞HIF-1α蛋白的表达可能与PI3K/Akt信号通路的激活有关。