转录因子E2F1调控KIR3DL1基因表达的分子机制

目的研究转录因子 E2F1对 KIR3DL1基因启动子转录活性的影响,明确其调控KIR3DL1基因表达的分子机制。方法采用 PCR 方法从 K562细胞基因组 DNA 中扩增突变型KIR3DL1基因启动子序列,将产物连接到 pGL3-Basic 荧光素酶载体,构建报告重组子;采用染色质免疫共沉淀方法检测 E2F1与 KIR3DL1启动子在细胞内的结合;采用阳离子脂质体 SuperFect 包裹突变型和野生型 KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子,然后转染 K562细胞,染色质免疫共沉淀方法检测E2F1与重组子在细胞内的结合,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性;将 E2F1真核表达载体与野生型 KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子共转染 K562细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。结果成功构建突变型 KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子,测序证实,在 K562细胞KIR3DL1启动子区1个潜在的转录因子 E2F1结合位点有1个自然发生的点突变(TTGGCGC→TTGGCGC);E2F1完全不能与 K562细胞中突变型 KIR3DL1启动子结合,但能与 NK-92MI 细胞中没有突变的野生型 KIR3DL1启动子结合;突变型 KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子保留了部分与E2F1的结合能力,但其相对荧光素酶活性较野生型降低了50%;共转染 E2F1真核表达载体使野生型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子的相对荧光素酶活性增加为对照组的2倍以上。结论转录因子 E2F1参与调控 KIR3DL1基因转录激活,E2F1结合位点上 CpG 二核苷酸的数量和甲基化模式可能影响转录因子 E2F1与靶序列的结合。