内参基因β-actin质粒标准品的构建

被引：12

作者：

王玉林

史进方

蔡惠芬

樊一笋

顾国浩

机构：

[1] 苏州大学附属第一医院检验科,江苏省临床免疫学实验室

来源：

中国组织工程研究与临床康复 | 2008年 / 12卷 / 48期

关键词：

β-actin; 内参基因; 荧光定量PCR;

D O I：

暂无

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

1001 ;

摘要：

为构建检测内参基因β-actin mRNA表达水平差异的标准品,以成人外周血细胞的总RNA为模板、Random 6 mers为引物反转录合成cDNA,用该cDNA为模板PCR扩增人β-actin基因相应的cDNA片段,构建PMD-18-β-actin重组质粒,鉴定测序后,用荧光定量PCR制作标准曲线。结果外周血提取的总RNA完整性良好,构建的β-actin质粒经PCR扩增后得到一186bp的清晰条带,测序结果与目的片段完全一致,且质粒的原始浓度为2.39×1013 copies/mL,倍比稀释至2.0×104copies/mL均能得到良好的标准曲线(R2=1),提示构建β-actin基因荧光定量PCR标准质粒成功。

引用

页码：9501 / 9504

页数：4

共 5 条

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