不同浓度骨碎补提取液对体外培养人牙髓细胞增殖及超微结构的影响(英文)

背景:体外培养人牙髓细胞难度很大,国内外已有生长因子对体外培养牙髓细胞增殖分化作用的研究,而中药骨碎补对体外培养牙髓细胞的影响,经作者检索未见报道。目的:观察不同浓度骨碎补提取液对体外培养的人牙髓细胞增殖分化的影响。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-03/2007-05在河北医科大学第四医院科研中心完成。材料:人牙髓细胞组织选自河北医科大学第四医院口腔科要求正畸治疗需拔除的健康阻生智齿着,取得所有供者对标本采集的知情同意。产地云南的骨碎补购自河北医科大学第四医院中药房。方法:采用组织块法体外培养人牙髓细胞。水提醇沉法提取骨碎补有效成分,以每1mL药液含生药1g加入积体分数为0.02的胎牛血清培养液,稀释成质量浓度为10,50,100,500,1000mg/L。分别以此培养液作用于体外培养的人牙髓细胞,以不加骨碎补提取液培养的细胞做对照。主要观察指标:①人牙髓细胞原代培养和来源鉴定。②四甲基偶氮唑盐法检测各质量浓度组骨碎补对人牙髓细胞增殖的作用。③免疫组织化学法观察各浓度组骨碎补对人牙髓细胞纤维连接蛋白的表达。④扫描电镜和透射电镜下观察骨碎补对人牙髓细胞超微结构的影响。结果:原代培养的人牙髓细胞呈梭形或多角形。各浓度骨碎补均对体外培养的人牙髓细胞有促增殖作用,其中以100mg/L浓度组促增殖作用最明显,可诱导牙髓细胞合成、分泌纤维连接蛋白。电镜下实验组人牙髓细胞表面枝状嵴丰富,细胞周围可见细胞外基质,细胞浆内有丰富粗面内质网和游离的核糖体,核内常染色质均匀分散,异染色质少。结论:含100mg/L骨碎补培养液对体外培养的人牙髓细胞有明显的促增殖作用。