特定微环境条件下人骨髓间充质干细胞定向诱导分化为脂肪细胞

背景:目前研究主要是利用大鼠等动物模型来探讨如何生成脂肪细胞,对于体外分离培养的人骨髓间充质干细胞向脂肪细胞表型转化的实验报道不多。目的:拟在体外建立人骨髓间充质干细胞向脂肪细胞诱导分化的实验方法。设计、时间及地点:细胞形态学体外观察,于2006-12/2007-11在山东省青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。材料:骨髓来源于青岛大学医学院附属医院行自体干细胞移植治疗糖尿病患者的骨髓血,IBMX,地塞米松,吲哚美辛,胰岛素等诱导剂为Sigma公司产品。方法:无菌条件下抽取骨髓血,联合应用密度梯度离心法及贴壁筛选法,以单克隆形式分离培养人骨髓间充质干细胞,当细胞汇合至90%时胰蛋白酶消化传代。取第3代骨髓间充质干细胞,加入含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100mg/L链霉素、1μmol/L地塞米松、10mg/L胰岛素、0.5mmol/LIBMX、50μmol/L吲哚美辛的低糖DMEM培养基,作为体外特定微环境向脂肪细胞方向诱导分化,以单纯加入低糖DMEM培养基的细胞作为对照组。诱导3周后行油红O染色。主要观察指标:骨髓间充质干细胞的形态变化及细胞表面标志鉴定,脂滴形成及脂肪细胞分化率。结果:接种后第2～3天骨髓间充质干细胞开始贴壁,两端有较长突起,呈克隆样生长,形成大小不一的集落;传代后骨髓间充质干细胞呈长梭形,漩涡样生长;第3代细胞CD44呈阳性,不表达CD34;由克隆扩增出的骨髓间充质干细胞具有高度的同源性。诱导第3周油红O染色示胞核呈蓝色,脂滴呈橙红色,脂肪细胞分化率为(86.0±5.6)%,对照组未见脂滴形成。结论:含有地塞米松、IBMX及胰岛素等诱导剂的体外特定微环境对骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞具有诱导促进作用。