多孔微载体无血清培养rCHO细胞生产u-PA

在 30L搅拌式反应器中无血清培养分泌尿激酶型纤溶酶原激活剂 (u PA)的DNA重组CHO细胞 ,定期部分更换Cytopore多孔微载体 ,使生长在多孔微载体中的细胞不断更新繁殖 ,解决大规模细胞培养中的细胞凋亡问题。在 91d连接换液培养过程中 ,细胞密度可维持在 (1 3～ 2 6 )× 10 7/mL ,活细胞比率维持在 90 %以上。在7 5L搅拌罐中培养细胞 ,利用外部周期性压力振荡刺激并结合载体更新技术 ,可减轻密度效应对细胞生长和表达的影响 ,在一定程度上提高细胞在高密度培养条件下的表达水平。在 6 7d连续换液培养中 ,细胞最高密度为 2 6 4× 10 7/mL ,活细胞比率维持在 95 %以上。与稳压操作相比 ,利用周期变压刺激技术可提高产量 10 %～ 2 0 % ,且可降低葡萄糖厌氧代谢生成乳酸的转化率 ,利用 4步纯化工艺 ,从含u PA约 135g的 2 10 0L上清中获得约 80 gu PA(单链比例约为 90 % )。