缺氧条件对成骨细胞VEGF和TGF-β1表达影响的实验研究

目的研究CoCl2对体外培养的鼠下颌骨成骨细胞的作用,观察缺氧条件对成骨细胞VEGF及TGF-β1表达的影响,为临床牵张成骨技术的分子生物学机制研究提供理论依据。方法取新生24h内Wistar大鼠下颌骨,改良酶消化法培养和纯化成骨细胞,采用HE染色、ALP组织化学染色、Ⅰ型胶原免疫组织化学、钙结节染色行细胞形态学及组织学鉴定,并绘制生长曲线。取第3代最佳生长状态的鼠下颌骨成骨细胞,用150μmol/LCoCl2处理(实验组),设正常状态下培养为对照组,分别于培养后0、3、6、9、12、24h,采用免疫荧光技术检测VEGF及TGF-β1表达。结果HE染色示成骨细胞形态多样,呈三角形、多角形、圆形及鳞片形等不规则形态,突起长短不一向外伸展,胞核清晰可见;胞浆丰富,呈粉红色,胞核蓝紫色,有时可见2个细胞核,密集处细胞形态不明显,分界模糊,仅见大圆核细胞。ALP组织化学染色示细胞胞质呈黑色颗粒,细胞核轮廓不清,细胞密集区可见大量阳性细胞。Ⅰ型胶原免疫组织化学染色示实验组阳性细胞均匀可见,胞浆呈棕黄色,胞核周围尤为明显,空白对照组细胞未见棕黄色颗粒。钙结节染色示成骨细胞于盖玻片上培养15d后,细胞聚集成不透明区域,呈结节样;茜素红染色后,有橙红色着色。培养各时间点对照组细胞激光共聚焦显微镜下可见较弱的VEGF表达荧光;实验组细胞随缺氧时间延长,VEGF表达荧光强度值增加,于术后9h达高峰,随后降至正常水平。培养各时间点激光共聚焦显微镜下可见两组细胞均有TGF-β1表达荧光,对照组各时间点荧光强度值均略高于VEGF对照组;实验组TGF-β1表达在缺氧3h短期成倍增加,随缺氧时间延长表达逐渐降低。结论经新生大鼠下颌骨培养的成骨细胞性状稳定;适当缺氧可诱导成骨细胞VEGF和TGF-β1表达增强。