高压氧促HIBD新生大鼠内源性神经干细胞增殖过程中Wnt-3蛋白的变化

目的近年来的研究已经证实高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)能够促进缺氧缺血性脑损伤(Hy-poxic ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠内源性神经干细胞(Neuralstem cells,NSCs)的增殖,并且发现Wnt信号途径参与神经干细胞的增殖,故本课题将探讨HBO对HIBD新生大鼠脑内源性NSCs增殖分化过程中Wnt-3蛋白的变化的影响及其它们之间的相关性。方法7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为正常对照组(CON),缺氧缺血性脑损伤组(HIBD)及高压氧组(HBO)。采用经典的Rice法制成HIBD模型,HBO组在HIBD后3h内进行HBO治疗(压力为2个绝对大气压,稳压1h,每日1次,连续7d)。采用BrdU/nestin,Wnt-3/nestin免疫荧光双标法,检测HIBD后6h,24h,3d,7d,14d,缺血侧侧脑室室管膜下区(subventricular zone,SVZ)增殖的NSCs及Wnt-3蛋白的动态变化,激光共聚焦显微镜(LSM510,Zeiss)分析细胞内nestin蛋白与Wnt-3蛋白的荧光强度,统计学分析二者相关性。Western blotting法检测缺血侧大脑半球nestin、Wnt-3总蛋白的动态变化。结果SVZ区BrdU+nestin+细胞于HBO治疗后3h开始增加,7d达最高水平,显著高于CON组与HIBD组(P<0.01),14d时BrdU+nestin+细胞数开始下降,但仍多于CON和HIBD两组(P<0.05);NSCs细胞膜表面Wnt-3蛋白于HBO治疗后3h开始增加,3d时达最高水平,并维持较高水平至14d时开始下降;直线回归分析示细胞内Wnt-3蛋白与nestin蛋白呈直线相关(r=0.893,P<0.05);Western blotting分析示缺血侧大脑半球Wnt-3蛋白于HBO后3d,7d一直维持较高水平,显著高于其他各时间点(P<0.05),至14d时表达开始下降;nestin总蛋白水平于HBO治疗后21h开始增加(P<0.05),7d达最高水平,后下降。结论高压氧可以促进HIBD新生大鼠内源性NSCs的增殖,其机制与Wnt信号活化有关。[中国当代儿科杂志,2007,9(3):241-246]