pIRES2-HPV18E2-EGFP质粒重组及其在HeLa细胞中的表达

被引：1

作者：

汪云 ^{[1
]}

李力 ^{[1
]}

李元朝 ^{[2
]}

吕凤林 ^{[2
]}

机构：

[1] 第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科

[2] 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤烧伤与复合伤研究室

来源：

第三军医大学学报 | 2006年 / 12期

关键词：

人乳头瘤病毒18型; E2基因; 基因重组; 转染;

D O I：

10.16016/j.1000-5404.2006.12.006

中图分类号：

R737.33 [子宫肿瘤];

学科分类号：

100214 ;

摘要：

目的构建人乳头瘤病毒18型E2基因片段(HPV18E2)重组表达质粒并予以表达,为进一步研制HPV18相关疾病提供材料。方法以重组质粒(pBR322-HPV18)为模板,PCR方法扩增HPV18E2DNA片段,将HPV18E2DNA与加强绿色荧光质粒(pIRES2-EGFP)重组构建重组质粒(pIRES2-HPV18E2-EGFP)。用酶切电泳及测序检查质粒重组后序列正确性。重组质粒转染Hela细胞。RT-PCR鉴定转染细胞中E2基因。结果PCR扩增DNA片段约为1 kb,与预期结果相同。克隆重组质粒pIRES2-HPV18E2-EGFP酶切后显示的酶切图谱与预期相同,而且测序验证插入片段全序列无改变。转染并用G418筛选后,在荧光显微镜下可见绿色荧光细胞的表达。转染细胞RT-PCR出现特异性条带。结论成功构建表达HPV18 E2蛋白的靶细胞模型。

引用

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