大鼠Nogo基因片段的克隆及与GST融合蛋白的表达和纯化

被引：3

作者：

张萍

程希平

费玲玲

王春婷

杨浩

陈镔复

鞠躬

机构：

[1] 第四军医大学基础部神经科学研究所

[2] 第四军医大学基础部神经科学研究所陕西西安

[3] 陕西西安

来源：

第四军医大学学报 | 2003年 / 19期

关键词：

Nogo基因; 克隆; 表达; 纯化;

D O I：

暂无

中图分类号：

R741 [神经病学];

学科分类号：

1002 ;

摘要：

目的 :获取大鼠Nogo基因片段并高效表达纯化 .方法 :用RT PCR技术 ,从成年SD大鼠脊髓的总RNA中 ,获得编码Nogo基因功能片段的DNA .测序后 ,通过酶切亚克隆至表达载体pGEX 4T 1,构建重组表达载体 ,并导入E .coliDH5α中 ,IPTG诱导表达重组的GST融合蛋白 .对重组融合蛋白过谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化 .结果 :获得成年SD大鼠Nogo(5 70～ 6 91和 10 2 8～ 10 89氨基酸残基 )的基因 ,测序结果与已发表的基因序列相一致 .重组GST融合蛋白经SDS PAGE分析 ,在相对分子质量 (Mr) 390 0 0和 32 0 0 0处 ,有特异的蛋白条带 .重组蛋白经谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化后 ,得到了高纯度的融合蛋白 .结论 :成功克隆成年大鼠No go基因片段 ,并在E .coliDH5α中高效表达 ,亲和层析后获得高纯度GST融合蛋白

引用

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